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    戈氏放線(xiàn)菌PCR檢測(cè)試劑盒的使用方法

    點(diǎn)擊次數(shù):198  更新時(shí)間:2025-04-11
    本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR,即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌樣品。
    戈氏放線(xiàn)菌PCR檢測(cè)試劑盒使用方法:
    一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
    1.注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
    2.標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
    3.用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
    4.在7號(hào)管中加入5μL 1×10E8拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
    5.換槍頭,在6號(hào)管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
    6.換槍頭,在5號(hào)管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
    7.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
    二、樣品DNA的制備
    8.如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
    9.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒兼容。
    三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
    10.如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
    11.產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)。
     
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