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    首頁   >    技術(shù)文章   >   腦膜炎奈瑟菌A/C群(NM-AC)核酸檢測試劑盒使用步驟

    腦膜炎奈瑟菌A/C群(NM-AC)核酸檢測試劑盒使用步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):1559  更新時間:2020-04-09

    腦膜炎奈瑟菌A/C群(NM-AC)核酸檢測試劑盒特點(diǎn):
    1、靈敏度高,抗污染能力強(qiáng),定量準(zhǔn)確,重復(fù)性好;
    2、樣本處理與PCR擴(kuò)增在同一個PCR反應(yīng)管中即可完成;
    3、無需加熱,無需離心,操作極其簡單,耗材消耗極少,只需微量標(biāo)本即可實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測;
    4、設(shè)置了內(nèi)對照(內(nèi)標(biāo)),設(shè)置了UNG酶+dUTP防污染體系,避免假陰性、假陽性結(jié)果的發(fā)生;
    5、設(shè)置了內(nèi)參比熒光ROX,校正加樣誤差和管間差異,使定量更準(zhǔn)確。

    操作步驟 

    1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

          10×PCR buffer             5μl

          dNTP mixl                 4μl

           引物1(10pM)               2μl

           引物2(10PM)              2μl

           Taq酶(2U/μl)            1μl

          DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl

          加ddH2O至               50 μl

        視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

    2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。

    3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

    4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

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